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产品名称:

cDNA文库构建

产品价格:
厂商性质: 工程商 产品时间: 2020-11-09
cDNA文库是指某生物某发育时期所转录的全部mRNA经反转录形成的cDNA片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。标准cDNA文库构建的基本原理是用 Oligo(dT)作逆转录引物,或者用随机引物,给所合成的cDNA加上适当的连接接头,连接到适当的载体中获得文库。
 文库构建流程

1.       样品QC

 

2.       从总RNA中分离mRNA(原始文库将采用至少2 µg mRNA进行构建)

 

3.       以带有NotI酶切位点的oligo(dT)Linker Primer为反转录引物,再在双链cDNA的5’端加SalII adaptor

 

4.       NotI酶切、过柱去除小片段

 

5.       将合成的双链cDNA与载体进行连接,连接产物转化DH10B感受态细胞

 

6.       cDNA文库的QC:检测库容量(重组子克隆数目);随机挑取30个克隆子进行PCR鉴定和双向测序分析,检测含插入片段的克隆子比例,检测平均插入片段大小

 

客户提供

 

        注明样品的种属,收集样品后,应将样品立即置于干冰保持低温运输。

 

我们提供

 

       含有文库的甘油菌和质量分析鉴定报告

 

质量保证

 

      文库含有至少4 x 106个原始克隆

 

       样品平均插入片断保证大于1.0 kb

 

     有超过85%的载体含有插入片段

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