使用核酸提取类试剂盒必须掌握一系列手段

发布日期： 2020-02-26

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　　核酸提取类试剂盒采用异硫氰酸胍及表面活性剂联合裂解细胞技术，添加*的病毒凝集剂，不需要进行仿抽提，可从细胞培养物、血浆、血清、分泌液、腹水、拭子等的样本中快速提取痕量的病毒或细胞的核酸（DNA和RNA）。

　　1、取待抽提的血清50μl置于微型离心管中，加入200μl抽提A液，颠倒数次充分混匀；（混匀后室温放置5分钟可达到效果）

　　2、加入250μl抽提B液，颠倒数次充分混匀（混匀后室温放置10min可达效果），13000rpm离心10min，倒去上清；
3、加入200μl抽提C液，颠倒数次混匀，13000rpm离心5min，吸弃上清（尽量去掉上清）；

　　4、室温放置或50℃加热5min晾干，加入25μl样本稀释液混悬沉淀物，短暂离心使液体落于管底部，上清液即为提取得到的核酸。

　　注：对于分泌物或棉拭子，先用适量无菌生理盐水把拭子上的分泌物洗入离心管中，或者把拭子泡在无菌生理盐水中，捻动使分泌物分散于液体中，然后高速离心5min后，去除大部分上清，余下的样本即应用上述步骤抽提核酸。

　　注意事项：

　　1、如果抽提的是病毒RNA，即提即用，保存请置于-80℃。

　　2、抽提A液及抽提B液可根据所用的提取物的量等倍加大用量。

　　3、抽提A液低温保存会有絮状物析出或凝结是正常现象，使用前置于50℃使融化，颠倒混匀，不影响使用。

　　4、血浆样本尽管也能直接提取，但先用红细胞裂解液处理去掉红细胞，效果将更好。

　　5、加入样本稀释液后仍有部分沉淀不溶解是正常现象，不影响后续实验。