微量细胞核酸提取中常见的挑战与解决方案

 

　　微量细胞核酸提取首要挑战是核酸得率低。微量细胞本身含有的核酸量极少，提取过程中不可避免的吸附损失、离心残留等问题，会进一步降低最终获得的核酸量，难以满足下游PCR、测序等实验对模板量的需求。对此，可采用优化的提取试剂，如选择吸附效率更高的硅基磁珠，其能在低浓度下特异性结合核酸，减少吸附损失；同时改进提取流程，缩短离心时间、降低离心转速，减少核酸在离心管壁的残留，还可通过增加洗脱次数、提高洗脱温度（如50-60℃），提升核酸洗脱效率，提高得率。

 

　　核酸纯度差是另一大难题。微量细胞样本中，蛋白质、多糖、脂质等杂质相对含量较高，提取时易与核酸共纯化，干扰后续酶促反应。为解决这一问题，需强化样本预处理环节，加入蛋白酶K可有效降解蛋白质，使用RNase抑制剂避免RNA降解；在纯化阶段，增加洗涤次数，选用含胍盐、乙醇的洗涤缓冲液，去除杂质；对于高杂质样本，可引入核酸纯化柱二次纯化，进一步提高核酸纯度。

 

　　此外，样本污染风险高也是微量细胞核酸提取中不可忽视的挑战。微量核酸样本极易受到外源性核酸（如环境中微生物核酸、操作人员携带的核酸）污染，且一旦污染，因样本量少，污染核酸对实验结果的干扰更为显著。为防范污染，需建立严格的实验环境，在超净工作台或负压生物安全柜中进行操作，定期对实验台面、仪器进行消毒；使用无核酸酶的实验耗材和试剂，避免试剂本身携带污染；同时设置阴性对照（如空白提取试剂）和阳性对照，实时监测提取过程是否存在污染。

 

　　针对微量细胞核酸提取中的得率、纯度、污染等挑战，通过优化试剂与流程、强化质量控制，可有效提升核酸提取质量，为后续科研与临床应用奠定坚实基础。