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免疫组化服务的操作步骤介绍

发布日期: 2022-11-15
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   近年来,随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现,使许多疑难得到了明确诊断。在常规病理诊断中,5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。尤其是免疫组化在诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可,其在低分化或未分化的鉴别诊断时,准确率可达50%-75%。
 
  免疫组化操作步骤
 
  ⑴、石蜡切片脱蜡至水。
 
  ⑵、3%H2O2室温孵育5-10分钟,以消除内源性过氧化物酶的活性。
 
  ⑶、蒸馏水冲洗,PBS浸泡5分钟x2(如需抗原修复,可在此步后进行)。
 
  ⑷、5-10%正常山羊血清(PBS稀释)封闭,室温孵育10分钟,倾去血清,勿洗。滴加一抗工作液,37℃孵育1-2小时或4℃过夜。
 
  ⑸、PBS冲洗,5分钟x3次。
 
  ⑹、滴加适量生物素标记二抗工作液,37℃孵育10-30分钟。
 
  ⑺、PBS冲洗,5分钟x3次。
 
  ⑻、滴加适量的辣根酶或碱性磷酸酶标记的链霉卵白素工作液,37℃孵育10-30分钟。
 
  ⑼、PBS冲洗,5分钟x3次。
 
  ⑽、显色剂显色3-15分钟(DAB或NBT/BCIP)
 
  ⑾、自来水充分冲洗,复染,脱水,透明,封片。
 
  从免疫组化结果而言,免疫组化技术服务主要涉及抗体免疫组化结果的描述与分析,图片的确定与选取,相关数据的提供,上述工作是免疫组化工作的重点内容,只有严格的免疫组化设计,标准的免疫组化操作,专业化的结果分析才能更好的满足客户的要求,这点对于形式为腹水,上清,培养液之类的抗体显得更为重要。
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