免疫组化服务的操作步骤介绍

发布日期： 2022-11-15

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　　近年来，随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现，使许多疑难得到了明确诊断。在常规病理诊断中，5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。尤其是免疫组化在诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可，其在低分化或未分化的鉴别诊断时，准确率可达50%-75%。

　　免疫组化操作步骤

　　⑴、石蜡切片脱蜡至水。

　　⑵、3%H2O2室温孵育5-10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。

　　⑶、蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟x2（如需抗原修复，可在此步后进行）。

　　⑷、5-10%正常山羊血清（PBS稀释）封闭，室温孵育10分钟，倾去血清，勿洗。滴加一抗工作液，37℃孵育1-2小时或4℃过夜。

　　⑸、PBS冲洗，5分钟x3次。

　　⑹、滴加适量生物素标记二抗工作液，37℃孵育10-30分钟。

　　⑺、PBS冲洗，5分钟x3次。

　　⑻、滴加适量的辣根酶或碱性磷酸酶标记的链霉卵白素工作液，37℃孵育10-30分钟。

　　⑼、PBS冲洗，5分钟x3次。

　　⑽、显色剂显色3-15分钟（DAB或NBT/BCIP）

　　⑾、自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。

　　从免疫组化结果而言，免疫组化技术服务主要涉及抗体免疫组化结果的描述与分析，图片的确定与选取，相关数据的提供，上述工作是免疫组化工作的重点内容，只有严格的免疫组化设计，标准的免疫组化操作，专业化的结果分析才能更好的满足客户的要求，这点对于形式为腹水，上清，培养液之类的抗体显得更为重要。