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免疫组化服务的相关问题解析

发布日期: 2022-10-23
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 免疫组化服务是通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究。组织或细胞中凡是能作为抗原或半抗原,如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。
1、出现非特异性背景染色怎么办?  
(1)冲洗不充分解决:每步冲洗3×5  
(2)组织中含过氧化物酶未阻断解决:可再配置新鲜3%H2O2封闭,孵育时间延长  
(3)组织中含内源性生物素解决:正常非免疫动物血清再封闭  
(4)血清蛋白封闭不充分解决:延长血清蛋白封闭时间  
2、脱片产生的原因有哪些?  
(1)组织切的不好,切的不均匀。  
(2)时间短,温度不够。  
(3)操作不规范,有脱片嫌疑的片子最好不甩或轻轻甩,用卫生纸从边缘上慢慢吸水。  
(4)抗原修复的时候高压时间过长了。此外,用EDTA修复比柠檬酸容易脱片。  
(5)使用PBS的时候尽量用泡的,不要冲。  
3、染色阴性怎么办?  
(1)操作步骤错误,重新试验,设立阳性对照  
(2)组织中无抗原,设立阳性对照片,以验证实验结果  
(3)一抗与二抗种属连接错误,仔细确定一抗与二抗种属无误  
4、苏木素复染后氨水返蓝怎么做?  
返蓝可以用碱性溶液(PBS/Na2HPO4/淡氨水)或45度温水.冷水蓝化均可。一般蓝化5~10min。