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快速蛋白质染色剂的操作方式介绍

发布日期: 2022-08-16
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   快速蛋白质染色剂为一种单组分染色剂,可直接对凝胶上分离的蛋白进行染色,用于SDS--PAGE凝胶、非变形PAGE凝胶,或argose胶的快速染色,在清晰背景上产生灵敏度0.5ng以上蛋白质的蓝色条带的经典的技术方法。本方法不需要甲醇、乙醇的固定和脱色。产品即到即用,性能稳定,操作便捷,敏感度高,显色清晰,重复性好得到非常广泛的使用。
 
  快速蛋白质染色剂的操作方式:
 
  1.洗涤PAGE电泳胶:去离子水洗涤3次,每次约5min。
 
  电泳结束后,取胶放入约200ml去离子水中,在侧摆或水平摇床上摇动5分钟,弃液体,再重复两次,共洗涤三次。
 
  注意:本洗涤步骤的目的是为了洗去凝胶中的SDS等干扰物质。如果不能充分去除SDS会导致背景较高。
 
  2.染色:加入约30-50ml快速蛋白质染色剂,染色1小时。
 
  弃去离子水,加入适量的快速蛋白质染色剂(每块大小约8×8厘米的凝胶需使用约30-50ml),使染色液能覆盖凝胶,且液面至少高出三个胶的厚度为宜,室温下在侧摆或水平摇床上进行染色,直至蛋白条带变清晰。
 
  注意:推荐的室温(20-25℃)染色时间为1小时,实际染色时间可以根据染色效果自行调整,染色至能看到清晰的目标蛋白条带后,弃染色液,加入适量的去离子水,停止染色反应,然后即可拍照记录。延长染色时间,不会增加背景颜色。
 
  3.脱色:去离子水至少脱色30分钟(或者过夜)),脱色的PAGE胶可于去离子水中保存。
 
  如果希望获得更加清晰的蛋白条带,可以加入约200ml去离子水室温洗涤约30分钟甚至过夜。通过去离子水洗涤可以进一步降低背景,获得更好的染色效果。