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快速蛋白质染色剂介绍5种经典使用方法

发布日期: 2022-09-19
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   在蛋白质染色方法中,考马斯亮蓝染色为常用,它克服了氨基黑染色灵敏度不高的限制,又比银染简便易操作。可常规方法需使用剧毒的甲醇和强刺激性的乙酸,难为了一众小白们。快速蛋白质染色剂厂家介绍蛋白质的含量测定有五种经典方法:
 
  1、凯式定氮法
 
  原理:蛋白质是含氮的有机化合物。蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,蛋白质含量。
 
  2、紫外吸收法
 
  原理:蛋白质分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸在280nm附近具有最大吸收,且各种蛋白质的这三种氨基酸的含量差别不大,因此测定280nm处的吸光度值可用于蛋白质含量的测定。
 
  3、双缩脲法
 
  原理:双缩脲是两个分子脲经180°C左右加热,放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4,形成紫色络合物,称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键,或通过一个中间碳原子相连的肽键,这类化合物都有双缩脲反应。
 
  紫色络合物在540nm处有最大吸收,颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。
 
  4、Folin-酚试剂法
 
  原理:此法是双缩脲法的发展,在碱性溶液中铜-蛋白质复合物还原磷钼酸-磷钨酸试剂(Folin试剂),.产生深蓝色(钼蓝和钨蓝混合物)。在一定的条件下,蓝色深浅与蛋白质的量成正比。
 
  5、考马斯亮蓝法
 
  原理:考马斯亮蓝G-250染料在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置由465nm变为595nm,溶液的颜色也有棕黑色变为蓝色,在595nm下测定的吸光度值与蛋白质的浓度成正比。
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