咨询热线
15800446246
您的位置: 网站首页 > 技术文章 > 实时荧光定量PCR服务在实际应用中的定量分析法

实时荧光定量PCR服务在实际应用中的定量分析法

发布日期: 2020-01-10
浏览人气: 931
   实时荧光定量PCR是一种在扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物的总量,通过内参或者外参法对待测样品中的特定基因序列进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR服务包括SYBRGreen荧光定量和TaqMan探针PCR,提供检验设计,RNA提取、标准品制备,数据分析和详尽的实验报告。所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。  
  1. Ct值的定义 
  在荧光定量PCR技术中,有一个很重要的概念 -- Ct值。C代表Cycle,t代表threshold,Ct值的含义是:每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。  
  2. 荧光域值(threshold)的设定 
  PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号,荧光域值的缺省设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍,即:threshold = 10 ′ SDcycle 3-15  
  3. Ct值与起始模板的关系 
  研究表明,每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,起始拷贝数越多,Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,其中横坐标代表起始拷贝数的对数,纵坐标代Ct值。因此,只要获得未知样品的Ct值,即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。
  实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。
扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站
访问手机站