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磷酸化蛋白检测试剂盒相较于传统方法的优势

发布日期： 2017-12-18
浏览人气： 1732
    磷酸化蛋白检测试剂盒已逐渐成为测定蛋白磷酸化的一种有力方法。ELISA的定量能力优于Western blot，且在调节激酶活性和功能的研究中表现出巨大的作用。这种微孔板形式的分析一般利用目的蛋白特异的捕获抗体，与磷酸化状态无关。随后让目的蛋白结合在抗体包被的分析板中，目的蛋白可以是纯的，也可以是复杂的异质样品(如细胞裂解液)中的一个组分。加入待分析的磷酸化位点特异的检测抗体。这些分析通常设计为显色或荧光检测。产生的信号强度与zui初样品中存在的磷酸化蛋白的浓度成正比。与更为传统的免疫印迹相比，磷酸化特异的ELISA技术具有一些优点。
    首先，利用经过校准的标准品，可轻松定量结果。
    其次，以三明治形式使用目的蛋白特异的两个抗体，带来了高的特异性。
    第三，ELISA的灵敏度更高允许使用更少量样品，检测低丰度的蛋白。
    zui后，微孔板形式的通量比传统的Western blotting要高得多。ELISA通常带来了激酶活性的间接测定。不过，另一类ELISA技术使用固定化的捕获抗体、底物和磷酸化底物的检测方法，带来激酶活性的更直接测定。