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蛋白共提取试剂盒的使用操作步骤

发布日期: 2017-02-22
浏览人气: 1329
    蛋白共提取试剂盒能够简单、快速的提取来源于哺乳动物细胞的细胞核和细胞浆蛋白,所提取蛋白保持生物学活性。抽提获得的核蛋白及浆蛋白纯度高,有效避免核/浆蛋白的交叉污染,可以用于Western、Gel Shift、报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。
    1.请在蛋白抽提前取出抽提试剂A、B和C进行预冷
    2.收集细胞,计数。离心去上清。
    3.1×107细胞中加入0.5ml细胞核抽提试剂A,涡旋5秒以充分混匀,冰上孵育10分钟。
注意:各种细胞的特性不同,需要根据不同细胞的特性调整细胞核抽提试剂A的用量,如果蛋白浓度小,按比例减少细胞核抽提试剂A及后续细胞核抽提试剂B、C的用量。
    4.4℃ 3000 rpm离心 10min,吸弃上清。
    5.加入374μL细胞核抽提试剂B,再加入26μL细胞核抽提试剂C
    6. 将步骤5中溶液加入玻璃匀浆管中,用玻璃匀浆管冰上反复匀浆20次,冰上孵育30min。
    7.4℃ 12,000 rpm离心20分钟,收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中,-20℃保存(此提取液为胞核蛋白)。 
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