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蛋白共提取试剂盒的使用操作步骤

发布日期： 2017-02-22
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    蛋白共提取试剂盒能够简单、快速的提取来源于哺乳动物细胞的细胞核和细胞浆蛋白，所提取蛋白保持生物学活性。抽提获得的核蛋白及浆蛋白纯度高，有效避免核/浆蛋白的交叉污染，可以用于Western、Gel Shift、报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。
    1．请在蛋白抽提前取出抽提试剂A、B和C进行预冷
    2．收集细胞，计数。离心去上清。
    3．1×107细胞中加入0.5ml细胞核抽提试剂A，涡旋5秒以充分混匀，冰上孵育10分钟。
注意：各种细胞的特性不同，需要根据不同细胞的特性调整细胞核抽提试剂A的用量，如果蛋白浓度小，按比例减少细胞核抽提试剂A及后续细胞核抽提试剂B、C的用量。
    4．4℃ 3000 rpm离心 10min，吸弃上清。
    5．加入374μL细胞核抽提试剂B，再加入26μL细胞核抽提试剂C
    6. 将步骤5中溶液加入玻璃匀浆管中，用玻璃匀浆管冰上反复匀浆20次，冰上孵育30min。
    7．4℃ 12,000 rpm离心20分钟，收集上清（尽量收集干净上清液）至新的离心管中，-20℃保存（此提取液为胞核蛋白）。