一文看懂什么是逆转录病毒包装服务

　　

　　什么是逆转录病毒包装服务：

　　10cm大皿接种5×106个Plat-E细胞，加入10ml含10%FBS的DMEM培养基过夜，12h后显微镜下观察细胞密度80%-90%为宜。15ug目的质粒和500ulOpti-MEM培养基混合，同时45ug转染试剂和500ulOpti-MEM培养基混合，5min后转染试剂Opti-MEM加至质粒Opti-MEM中，静置20min，将混合物滴入Plat-E细胞中混匀，37℃5%CO2培养箱中培养，8-10h后更换新鲜DMEM培养基。转染48h，72h后收集病毒上清，0.44um滤器过滤-80℃保存。

　　

　　慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种，它能够将靶基因导入到一些较难转染的细胞，如原代细胞等，并且将靶基因随机整合到宿主的基因组中，从而大大增加了转染效率，并且能够在细胞系中稳定表达若干代，可以进行稳转细胞株的筛选。因为是随机整合，也有不确定因素，有些公司还能提供定点整合技术，将靶基因定点整合到基因组特定的部位，从而保证其高效表达并且对细胞不产生随机整合可能产生的伤害。

　　

　　慢病毒载体基因组是正链RNA，其基因组进入细胞后，在细胞浆中被其自身携带的逆转录酶逆转录为DNA，形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录mRNA，回到细胞浆中，表达目的蛋白或产生RNAi干扰。