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从基础去认识微量细胞核酸

发布日期: 2021-09-15
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   它主要目的在于提供一种适用于超微量细胞核酸提取的试剂盒及方法,以解决现有技术中难以对少于50个细胞的超微量样本进行核酸提取的问题。本试剂盒基于硅胶柱纯化技术,提取过程中无需使用有毒的酚氯抽提,也无需进行耗时的醇类沉淀,整个过程只需35分钟。
  
  临床及生物医学研究中常常需要从各种生物组织或细胞中抽提基因组dna或mrna,应用核酸扩增技术测定其成分,这是用于病症的辅助性分析和诊断的一种高度敏感,且最为直接的检测手段。所以核酸提取是生物医学研究和临床上进行基因表达水平检测、基因克隆或测序等工作之前,样品处理的必要步骤。
  
  生物样品,如培养的细胞、动植物组织、体液(如血液、分泌物、棉拭子、脓液、痰液、组织液等)、微生物样品等都需要经过适当的处理,将其中的核酸提取出来进行下一步的分析,如基因表达水平检测、基因克隆或测序等。目前常用的核酸提取试剂中都采用胍盐、表面活性剂、酚、氯仿等作为样品裂解、核酸纯化试剂;常用的操作方法有手工法、吸附柱法和磁珠法等。
  
  微量细胞核酸中核酸提取方法种类很多,如酚、氯仿等有机溶剂抽提法、硅胶膜吸附柱法等。但由于操作过程中使用到各种有机溶剂会危害人体健康,操作步骤繁琐复杂,单位时间通量低不易实现自动化,提取出的核酸浓度纯度较低等因素为传统核酸提取技术的瓶颈。
  
  目前对于临床珍贵的组织样本、穿刺样本或法医取证的少量样本dna、rna共提取的方法依然是将细胞裂解液分成两部分,一部分用trizol法(即硫氰酸胍-酚-氯仿抽提法)提取rna,一部分用酚-氯仿-异丙醇-乙酸氨法抽提或者是膜吸附柱的方法提取dna和rna。无论是trizol法还是膜吸附柱法提取核酸,都是基于组织样本或者是穿刺样本,细胞数量远远超过100个。而对于临床微量细胞样本,当细胞数量只有5-20个,或细胞数量小于50个时,现有的技术方案并不适用于同时提取超微量细胞中的dna和rna。
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