关于BCA蛋白定量试剂盒说明书上的微型定量操作

发布日期： 2021-05-19

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　　BCA蛋白定量试剂盒是一种灵敏并且抗干扰能力强的蛋白定量检测试剂盒。本试剂盒方便快捷，加入待测样品1小时即可进行吸光度测定，对蛋白定量线性范围在31.2-1000μg/ml之间，灵敏度≤31.2μg/ml。特别适合用于RIPA裂解液提取的细胞和组织蛋白样品中的蛋白浓度测定。

　　1. 吸取25ul标样或样品分别加入到96孔板的各孔中。

　　2. 每孔加入200ul的BCA工作液。摇晃混匀30s，盖住各样品孔。

　　3. 标准检测标准检测：：在37°C孵育30min或室温放置2–16h。加强型检测加强型检测加强型检测：：在60°C孵育15min。

　　4. 冷却至室温。

　　5. 在562nm吸光值。

　　注意：如果光度计没有配备562nm滤波片，波长在540–590nm范围的都可以使用。

　　6. 校正的吸光值是将各标样和试样的读数减去空白样吸光值。

　　7. 比照已知BSA量制作的标准曲线读取蛋白浓度。

　　注意：如果机器附带提供标准曲线软件可以帮助获得精确的结果。

　　8. 参照标准曲线，根据各蛋白试样的校正吸光值，在标准曲线的线性范围内读出各样品的蛋白浓度。 9. 根据样品体积和稀释度计算原来样品中的蛋白量。

　　标准型定量需要的蛋白样品较多（50ul），这种情况下BCA工作液与蛋白样品的体积比是20:1，干扰定量的物质的影响会较小；微型定量需要的蛋白样品量较少（25ul），非常适合96孔板式的高通量操作。此种情况下BCA工作液与蛋白样品的体积比是8:1，干扰定量的物质的影响相对会较大。