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不可避免,蛋白质提取检测试剂做定量测定

发布日期: 2019-11-15
浏览人气: 797
   蛋白质提取检测试剂适用于测定蛋白浓度在20-5000μg/ml样品。测定前取1-2个样做预实验,若A测定管-A空白管﹥1.5,需将样本用提取液稀释后再测定,以确保测定的准确性。大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液,少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中,因些,可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。由于蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸,因此蛋白质具有吸收紫外光的性质,大吸收峰在280nm波长处。在此波长范围内,蛋白质溶液的光密度OD280nm与其浓度呈正比关系,可作定量测定。
  自备实验用品及仪器:
  台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计、移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。试剂组成和配制:
  试剂A:液体50mL×1瓶,4℃保存。试剂B:液体1mL×1支,4℃保存。标准蛋白:液体2mL×1支,4℃保存。
  工作液配制:临用前请根据拟用工作液体积(样本数×1mL),将试剂A和B按照50:1的比例混合,盖紧后充分混匀。样品中可溶性蛋白质提取:
  1.液体样品:澄清无色液体样品可以直接测定。2.组织样品:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液(自备),根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水)冰浴匀浆,8000g,4℃离心10min,取上清,即待测液。3.细菌、细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。测定操作:
  1.分光光度计预热30min,调节波长到562?nm,蒸馏水调零。2.工作液置于60℃水浴预热30min。
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