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游离DNA提取试剂盒的操作步骤

发布日期: 2018-04-20
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游离DNA提取试剂盒专为从血清或是血浆中提取游离循环DNA而设计,该试剂盒根据样品量分为200μl样品的小提试剂盒以及适用样品量为1ml,2ml,2.5ml,5ml大提试剂盒。所用样品为新鲜血浆或是血清样品,-80℃的冻存样品也适用但不能反复冻融。试剂盒可有效结合血浆及血清中浓度低至50pg/ml的游离DNA片段,由于该试剂盒zui后洗脱体积可低至20μl,这一特性使试剂盒具有浓缩提取低浓度游离DNA片段的作用。提取得到DNA片段既可直接用PCR扩增,qPCR测定,二代测序(NGS)等下游分子操作,也可置于-20℃储存备用。游离DNA提取试剂盒的操作步骤 
1. 请自行准备:无水乙醇、1.5mL离心管。 
2. 取出洗涤液,按以下操作: 
a) 洗涤液A:21mL加入9mL无水乙醇;42mL加入18mL无水乙醇。 b) 洗涤液B:9mL加入21mL无水乙醇;18mL加入42mL无水乙醇。 c) 配制好的洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。 
3. 取1.5mL离心管,加入200μL样本,4μLDNA Carrier混合均匀,加入300μL 裂解液及20μL 消化液,振荡混匀,56℃水浴10 分钟。
4. 加入1000μL无水乙醇,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响DNA的提取与后续实验。 
5. 将吸附柱放入收集管内,将760μL上述溶液转入吸附柱内,静置2 分钟,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液;
6. 将吸附柱放回收集管内,将剩余760μL溶液转移至吸附柱内,重复步骤5。 
7. 将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液A至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液。
8. 将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液B至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液。
9. 将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 4℃离心2 分钟,离去残留的洗涤液。 
10. 取出吸附柱,放入新的1.5 mL 离心管内,加入30-50 μL 洗脱液,静置3 分钟,12,000 rpm 4℃ 离心2 分钟,收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。 
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