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支原体PCR检测试剂盒的操作步骤

发布日期: 2017-01-06
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    支原体PCR检测试剂盒中含有PCR反应所需要各种试剂组分,如:引物、dNTPs、缓冲液、Taq酶、稳定剂等。PCR反应液中加入检测样品和Taq酶,即可进行PCR扩增反应。PCR扩增产物经琼脂糖电泳染色判断,阳性样本将在290bp处出现特异性条带。
    1.收取待检样品(贴壁细胞:细胞生长至80%左右即可,送检细胞不能用消化液消化细胞,可以使用细胞刮刀刮取细胞;悬浮细胞:细胞生长至80%左右即可),取150ul(约1~3×105细胞数)至离心管,沸水浴10min 。 
    2.将煮沸过的细胞悬浮液12000rpm离心2-5min。 
    3.取上清4ul作为PCR反应模板。 
    4.充分融化PCR反应液,按下列表格配制反应混合液,并以21ul/管分装至PCR反应管中。
    5.每个PCR反应管中加入处理好的样品4ul,DNA阳性对照和阴性对照各加入4ul/管。 
    6.将所有PCR反应管放入PCR仪,参照以下参数运行PCR仪。
    7. 取5ul PCR扩增产物,在1%琼脂糖凝胶上直接点样(注:无需再加溴酚蓝,扩增产物已包含溴酚蓝),120V电泳20分钟(可根据电泳仪的情况,适当调整参数)。 
    8. EB染色观察。 
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