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细胞磷酸化蛋白提取的方法

发布日期： 2016-10-19
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    磷酸化蛋白检测试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取磷酸化蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。细胞磷酸化蛋白提取：
    1.提取液制备：每500ul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
    2.取5-10×106个细胞，在4℃，1000rpm条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
    3.用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
    4.每5×106个细胞中加入500ul冷的蛋白提取液，混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。
    5.在4℃，14000rpm条件下离心15分钟。
    6.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到磷酸化蛋白。
    7.将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。