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miRNA分离纯化试剂盒的使用方法

发布日期: 2022-08-20
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   miRNA分离纯化试剂盒在高离序盐状态下选择性吸附于miRNA/RNA吸附柱上,再通过一系列快速的漂洗-离心洗脱得到纯净的miRNA/RNA。无苯酚、氯仿DNA/RNA快速提取技术基础上配合分离技术同时得到的miRNA/RNA/基因组DNA纯度高,互不干扰。得到的miRNA/RNA不需要DNase消化,可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。基因组DNA也可以直接用于下游的Southern、酶切、PCR等各种试验。
 
  使用方法:
 
  1.在纯化好的100μL总RNA(含大RNA和小RNA)中,加入50μL溶液A,振荡30秒混匀。如果RNA样品体积不足100μL,可以用RNase-free水补足,如果体积超过100μL,可以用本公司核酸浓缩剂浓缩到100μL。
 
  2.室温12000~15000g离心30分钟。小RNA在上清中,大RNA在沉淀中。
 
   注意:离心时间不能短于30分钟,否则大RNA沉淀不充分。
 
  3.小心将上清液转移到干净的1.5mLRNase-free塑料离心管中。留下的沉淀可以用75%乙醇洗涤后做大RNA电泳对照用。
 
  4.在上清液中加入200μL溶液B,振荡30秒混匀。
 
  5.室温12000~15000g离心10分钟,小心弃上清。由于溶液B中有惰性的助沉剂,所以得到的小RNA沉淀肉眼可见。
 
  6.加入1mL溶液C,震荡数秒。
 
  7.室温12000~15000g离心10分钟,小心弃上清。
 
  8.短暂离心数秒,小心吸弃残留液体(约50μL左右)。
 
  9.在沉淀中(含小RNA)加入30~100μLRNase-free水,吹打溶解即得小RNA溶液。注意:不能只吹打管底部分,还需要吹打整个离心管管壁的离心面部分,因为上面也有有小RNA沉淀。
 
  10.最好先PAGE-银染检测小RNA纯度再使用。